高鐵還原酶（ferric-chelate reductase,FCR）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

高鐵還原酶（ferric-chelate reductase,FCR）催化高價鐵螯合物中的Fe3+還原為Fe2+，在部分物種鐵元素的吸收中有重要作用。

測定原理：

FCR 催化Fe³⁺還原為Fe²⁺，Fe²⁺和ferrozine 反應顯色，在 562nm 下有特征吸光值。

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試劑組成和配制：

需自備儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1ml 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

粗酶液提取：

按照組織質量（g）：水ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 蒸餾水），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 562nm，蒸餾水調零。

2、工作液配制：將試劑一、二、三以 1:1:1 的比例混合。臨用前配制，用多少配多少

3、在 1ml 玻璃比色皿中，加入 250μl 樣本上清和 750μl 工作液，混勻，記錄初始吸光值A1 和 30min后的吸光值A2。ΔA=A2-A1。

FCR 活性計算公式：

標準曲線：y = 8.0014x + 0.0011，R2 = 0.9997；

按樣本質量計算

單位定義：每 g 樣本每分鐘產生 1nmolFe2+-ferrozine 定義為一個酶活力單位。

FCR（nmol/min/g 鮮重）=（△A-0.0011）÷ 8.0014×1000×V 標÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T = 4.166×（△A-0.0011）÷W

按樣本蛋白濃度計算

單位定義：每 mg 蛋白每分鐘產生 1nmolFe2+-ferrozine 定義為一個酶活力單位。

FCR（nmol/min/mg prot）=（△A-0.0011）÷8.0014×1000×V 標÷(V 樣÷V 樣總×Cpr)÷T =4.166×

（△A-0.0011）÷Cpr

V 樣總：加入提取液體積，1 ml；V 樣：反應中樣品體積，250μl；V 標：加入標準品體積 ，250μl；

T：反應時間，30min；W：樣品質量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；1000，μmol 到nmol 的轉換系數。

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