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高效動物組織/細胞總 RNA 提取試劑盒
FlashPure Plus Tissue/Cell Total RNA Mini Kit
高效動物組織/細胞總RNA提取試劑盒
目錄號：91451
產品內容
產品成份 | 91451-50（50 次） |
裂解液 ACL Plus | 30 ml |
去蛋白液 RW1 | 40 ml |
漂洗液 RW | 10 ml（需加入zhi定量無水乙chun） |
RNase-Free H2O | 10 ml |
DNA 清除/RNA 吸附通用柱 | 100 套 |
RNase-Free 1.5 ml 離心管 | 50 支 |
自備試劑
無水乙chun
保存條件
室溫（15 ~ 25℃），有效期 12 個月。
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
產品簡介
適用于快速提取各種動物組織、細胞的總 RNA，采用 gDNA 過濾器，高效濾除gDNA，不需要繁瑣的DNase I消化過程，提取的RNA，可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通轉錄組測序、RACE、芯片等。
產品特點
1. 無毒：免氯仿、免β-巰基乙chun！
2. 高質：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！
3. 高效：提取全過程僅需 10 min！
重要提示：
① 第一次使用前，請先在漂洗液 RW 中加入無水乙chun，詳見瓶身標簽。
② 所有離心步驟均需要在室溫（15~25℃）下進行。
③ 肝臟、脾臟、腎臟、胰腺、心臟的樣本投入量不要超過 10 mg。
操作步驟：
1. 動物組織：
a．電動勻漿：取新鮮組織 10~25 mg，加入 500μl 裂解液 ACL Plus，電動勻漿，直到無明顯組織塊即可。
b．液氮研磨：在液氮中研磨組織成細粉，取 10~25 mg 組織細粉加入500μl裂解液 ACL Plus，劇烈渦旋振蕩 20 sec，充分裂解。
c． 將勻漿后裂解物 13，000 rpm 離心 3 min。
d．下接步驟 3。
2. 細胞
a．懸浮細胞：離心收集細胞，加入500 μl裂解液 ACL Plus（<7x106 細胞），吹打混勻，劇烈渦旋振蕩 20 sec，充分裂解。
b．貼壁細胞：吸棄細胞培養基，可以直接在培養皿中加裂解液 ACL Plus進行消化、裂解；或先用胰mei消化后離心收集細胞，再加入裂解液，每<7x106細胞加入 500 μl 裂解液 ACL Plus，吹打混勻，渦旋振蕩至無明顯細胞團，使其充分裂解。
貼壁細胞培養數量表：
培養器皿 24 孔培養板 6 孔培養板 | 面積（cm2） 2 9.6 | 培養液量（ml）1.0 2.5 | 細胞數量 5×105 2.5×106 |
3.5cm 培養皿 | 8 | 3.0 | 2×106 |
6cm 培養皿 25cm 培養瓶 100cm 玻璃培養瓶 | 21 25 33 | 5.0 5.0 10 | 5.2×106 5×106 7 x 106 |
3. 將裂解物上清或者裂解物全部加到 DNA 清除/RNA 吸附通用柱中（以下簡稱通用柱），13,000 rpm 離心 1 min，丟棄通用柱的內管，
保留濾液（RNA 在濾液中）。
4. 向濾液中加入0.5倍體積（通常為 250 μl）的無水乙chun，吹打混勻。
5. 將濾液混合物全部加入一個通用柱中，13,000 rpm 離心1 min，倒棄
濾液。此時，RNA被吸附在膜上。
6. 加入700μl去蛋白液 RW1,室溫放置1min,13,000 rpm 離心 30 sec，
倒棄濾液。
7. 加入500μl漂洗液 RW，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。
8. 重復步驟 7。
9. 把通用柱放回收集管中，13,000 rpm 離心 2 min，che底除去膜上殘留
的乙chun。
10. 取出通用柱，放入新的 RNase-free 1.5 ml 離心管中，向吸附膜的中央
懸空滴加 30-50μl RNase-Free H2O（事先在 70-90℃水浴中加熱可提
高產量），室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min。
11. 得到的 RNA，可直接用于下游實驗，或于-70℃保存，以免降解。
附錄：
一、免液氮直接研磨（自動研磨儀）——適用于新鮮樣本
a. 在 2.0 ml 液氮研磨管中加入 4 mm 兩粒，加 500 μl 裂解液 ACL
plus，放進 20 mg 左右的樣本，設置 65 個頻率，震蕩 2 min。
b. 將裂解物 13,000 rpm 離心 3 min，沉淀不能裂解的碎片。
二、液氮研磨（自動研磨儀）:
a. 把研磨模塊丟到液氮中預冷，直到沒有氣泡冒出視為預冷完畢。
b. 在 2.0 ml 液氮研磨管中放入 3mm 鋼珠 3 粒，放進 20-30mg 樣本，
投入液氮中預冷。
c. 把預冷好的離心管插入研磨模塊中，放進研磨儀，設置 55 個頻率，
震蕩 30~60 sec。（以北京赫得研磨儀——京 N9548 為例）
d. 研磨完成后，馬上加 500 μl 裂解液 ACL Plus，劇烈渦旋振蕩,充分
混勻。
e. 將裂解物 13,000 rpm 離心 3 min，沉淀不能裂解的碎片。
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