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諾博萊德 病du基因組DNA/RNA提qu試劑盒
病du基因組DNA/RNA提qu試劑盒 質粒提取
產品貨號：D0298
產品名稱：病du基因組DNA/RNA提qu試劑盒
產品規格：100T/50T
產品簡介：
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
NobleRyderD0298 病du基因組DNA/RNA提qu試劑盒本試劑盒適合于從血清、細胞上清、淋巴液中提取病毒 DNA/RNA，不適合于細胞等組織內病毒 DNA/RNA 的提取。
使用本試劑盒提取的基因組 DNA/RNA 可用于各種常規操作，包括酶切、PCR、文庫構建、RT-PCR 實驗等。
操作步驟（僅供參考）：
使用前請先在漂洗液中加入一瓶新開啟的無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽，蓋好搖勻。所有離心步驟均在2-8℃條件下進行。
1.取病毒上清液0.5mL，12000rpm離心5min，盡量吸盡上清使用，棄去沉淀（如無沉淀可省去此步）。
2.向病毒上清中加入20μL 10mg/mL的蛋白酶K，充分混勻，65℃消化10min，期間可顛倒離心管混勻數次。
3.吸附柱前處理：從包裝中取出吸附柱，放入收集管中，加入700μL預洗液，室溫放置2min，2-8℃，12000rpm 離心 2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中待用。
4.向病毒上清中加入500μL結合液，充分混勻。再向管中加入400μL無水乙醇，充分混勻，此時可能會出現絮狀沉淀，不影響DNA/RNA的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入處理好的吸附柱中，靜置2min。（吸附柱的最大容積為750μL，可分兩次加入。一次吸附完離心后再將余下的混合液體加入柱中靜置離心。）
5.12000rpm 離心 2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
6. 向吸附柱中加入700μL漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
7.向吸附柱中加入500μL漂洗液，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
8.12000rpm 離心 2min，將吸附柱置于室溫或 50℃溫箱放置數分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會影響后續的實驗如酶切、PCR等。
9. 將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加50μL-100μL經65℃水浴預熱的RNase free ddH2O，室溫放置 5min，12000rpm 離心 2min。即可得到高質量的病毒基因組DNA/RNA。
注意事項：
1.經常更換新手套。因為皮膚經常帶有細菌，可能導致RNase污染。使用無RNase的塑料制品和槍頭避免交叉污染。提取RNA時最好在RNase free的環境中操作。
2.樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的DNA/RNA提取量也下降。
3.若結合液中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解。
4.如果樣品消化不che底，后面的離心步驟中可能會出現堵柱子的情況，可適當延長離心時間。
5.洗脫緩沖液的體積最好不少于50μL，體積過小會影響回收效率。
6.提取產物應保存在-70℃，以防基因組降解。
7.RNA 檢測：得到的基因組 RNA 片段的大小與病毒的保存條件和種類等因素有關。由于病毒不含有核糖體RNA，所以常規電泳無法檢測，只有后期實驗才可檢測到。D260值為1相當于大約40μg/mL單鏈RNA。
8.DNA 檢測：得到的基因組DNA片段的大小與病毒的保存條件和種類等因素有關。D260值為1.0 相當于大約50μg/mL 雙鏈DNA、40μg/mL 單鏈 DNA。如果病毒含量過低，最后提取的基因組DNA電泳可能無法檢測到，但PCR等其他實驗還會有結果。
病du基因組DNA/RNA提qu試劑盒 質粒提取
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D0298 病du基因組DNA/RNA提qu試劑盒 100T/50T
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